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免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質功能的實驗方法。Co-IP是在IP的基礎上衍生出來的實驗方法,是證明蛋白相互作用的金標準。通過檢測免疫沉淀下來的蛋白復合物來證實中是否存在與X蛋白相互作用的Y蛋白。

其基本原理是,在細胞裂解液中加入抗X蛋白的抗體,孵育后再加入與抗體FC片段特異結合的Protein A/G-瓊脂糖微珠,若細胞中有與Y結合的X蛋白,就可以形成這樣一種復合物: Y—X—抗X抗體—Protein A或G ,經變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,復合物又被分開。然后經免疫印跡或質譜檢測目的蛋白。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的,符合體內實際情況,得到的結果可信度高。

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實驗流程:

1)構建相關真核表達載體,轉染細胞并獲得表達;

2)蛋白質抽提與定量;

3)免疫沉淀(以normal IgG作為對照);

4)免疫沉淀產物SDS-PAGE和western blot分析;

5)完整技術服務實驗報告提交。

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